Prekosyon pou elèktroforèz jèl polyacrylamide

· polyacrylamideJèl dwe pa monomè akrilamid, polimerizasyon materyèl kòmanse, katalis, ak dwa a nan sèl ak melanj tanpon ansanm.

· akrilamidak bis (n, n '- metilèn doub akrilamid) se monomè fòm matris la jèl.

· Amonyòm persulfate kòmanse adezif pwosesis polimerizasyon. Fòmilasyon lakòl la mande pou solisyon persulfate 10% amonyòm prepare nan dlo. Pifò nan enfòmasyon ki endike yon bezwen pou itilize aktif. Sepandan, ka solisyon an 10% dwe mete nan 4 ℃ pou plizyè semèn san yo pa pèt siyifikatif nan aktivite. Fè jiska 10 ml ak jete lè lakòl la echwe nan total.

Ide: pousantaj la nanakrilamidNan sekans lakòl ak lakòl pwoteyin se pa menm bagay la. Si lè l sèvi avèk premade akrilamid: BIS solisyon, asire w ke ou jwenn boutèy la dwa.

· Temed (N, N, N ', N'- Tetramethyl ethylenediamine) se yon katalis, nan yon boutèy mawon, yo mete l nan frijidè a. Add jis anvan vide lakòl.

· Polyacrylamide elèktroforèz itilize vè nan elèktroforèz ta dwe lave anvan ak apre chak fwa. Apre elèktroforèz, lave avèk yon bwòs mou ak twal nan dlo savon cho, rense l avèk dlo distile epi kanpe pou sèk.

· Imidite ak pousyè ka lakòz ak polymère kre. Anvan elèktroforèz, netwaye plak la vè ak cleaner vè ak siye l 'ak yon bwòs mou. Lave ak dlo distile ak sèk byen ak yon papye siye. Rense ak 70% etanòl anvan eswiyan ak papye ede netwaye ak pi vit siye. Add echantiyon nan akrilamid siksesif: bis, dlo, solisyon tanpon, persulfate amonyòm, tan. Souke byen epi vide imedyatman.

Li pa nesesè pou polyacrylamide degas anvan polimerizasyon. (Acrylamide itilize yo dwe mete yo nan yon vakyòm yo retire bul paske oksijèn inibit polimerizasyon.)

Orizontal lakòl pwen echantiyon konsèy.

· Mete yon moso papye nwa nan bwat anba a, background nwa pou fè kèk echantiyon twou pou wè pi klè.
· Tank lakòl plen tanpon, jis sou koloidal la.
· Si kwen an gen yon limyè, vire sou limyè yo, kite limyè klere koloidal. Trase echantiyon an nan pipèt la.
· Sèvi ak aparèy pipetting otomatik.
· Nan 10-200 MU 1 likid k ap deplase pwen ka itilize nan pi fò nan pwen yo sou echantiyon an. Pou twou echantiyon piti anpil (mwens pase 10μ1), tèt la pipèt long itilize pou sekans lakòl se pi bon.

· Pipetting jis benyen nan echantiyon an, respire tou dousman k ap deplase likid. Echantiyon an ka parèt kolan ak gliserin, ak rapid ponpe ka trase bul lè nan tèt la pipèt.

· Echantiyon apre respire tèt pipetting, yo ap deplase tèt likid dousman sou kwen nan tiyo a oswa papye eswiyan souse tèt likid deyò nan ti gout yo. Fè atansyon pa souse echantiyon an.

Mete echantiyon an nan twou echantiyon an

· Aparèy pipeting kenbe yon ti kras presyon, fè echantiyon yo yon ti kras deplase debòde tèt likid.
· Tèt la pipeting eleman nan zòn de defans la, yon ti kras pi wo pase twou yo plas, kenbe presyon pozitif. Ka pwent an nan pipèt la dwe mete nan yon ti twou.
· Dousman ak piti piti echantiyon yo soti. Se pwent pipèt la mete pi wo a twou a echantiyon pwen, ak echantiyon an ap antre nan twou a. Se pou echantiyon an koule ranpli twou a echantiyon olye pou yo pouse nan.
· Yon fwa dènye gout echantiyon an ak tèt likid, likid ap deplase nan dezyèm janm an, tou dousman ogmante mouvman an likid, deplase soti nan tanpon

Ki jan yo fè echantiyon lakòl vètikal?

· Twou echantiyon pwen lakòl vètikal ki te fòme ant de moso vè. Nan lakòl trè mens, tèt la pipèt pa menm ka mete ant de plak vè. Gade gliserin la! Mete tèt la pipèt sou twou a echantiyon ak echantiyon an ap antre nan twou a.
· Echantiyon pwen anvan, asire w ke ou mete pwen vètikal la nan polypropylène acyl jèl echantiyon twou rense pwòp. Lave lwen akrilamid la unpolymerized ak dlo a ki ka parèt nan pati anba a nan twou a echantiyon. Dlo a ka fè twou a echantiyon siyifikativman pi piti. Sèvi ak yon sereng 25ml oswa 50ml ak yon zegwi 18-kalib. Vide nan tanpon an elèktroforèz ak ak anpil atansyon kole twou a echantiyon.
· Li ka difisil yo wè twou a echantiyon, men nan menm bagay la tou, rès la se fasil. Si gen twou depase, yo ka teste tanpon an dwe teste ak bromofenol ble.